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SdsPage
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SDS Polyacrylamide Gel Electrophoresis

SDS-PAGE is an example of a MultiphasicBufferSystem for the resolution of proteins, however, proteins are pretreated by boiling with the detergent SDS (sodium dodecylsulfate) in the presence of reducing agent prior to loading. This causes the polypeptide chains to be unfolded and coated with an approximately uniform negative charge. Proteins are thereby separated primarily on the basis of their molecular weight.

Bio-Rad makes a popular SDS-page minigel apparatus for which there are gel recipies.

stacking gel

degas under vacuum before initiating polymerization

resolving gel

degas under vacuum before initiating polymerization

To initiate polymerization add APS (ammonium persulfate) and TEMED.


Reagents

4x Tris/SDS pH 6.8 stacking gel buffer
  1. dissolve 6.05 g Tris-base in 40 ml H2O
  2. adjust pH to 6.8 with 1 N HCl
  3. add H20 to 100 ml
  4. add 0.4 g SDS
store at room temperature

4x Tris/SDS pH 8.8 resolving gel buffer

  1. dissolve 91 g Tris-base in 300 ml H2O
  2. adjust to pH 8.8 with 1 N HCl
  3. add H2O to 500 ml
  4. add 2 g SDS
store at room temperature

5x SDS electrophoresis buffer

Do not adjust pH (should be 8.3). Store at room temperature.

6x SDS sample buffer

store in 1 ml aliquots at -20C


Comments

Sf3lo puedo decir una cosa. Yo trabaje9 en una Low cost como tuilrpante.No voy a hablar de lo que cuesta un billete o no. En mi caso, siempre e intentado hacer bien mi trabajo y tener un buen trato con la gente a pesar que hay que estar a pie del caf1f3n para saber a lo que estamos expuestos y sometidos diariamente. La gente es muy pero que muy maldeducada y a veces muchas veces, no saben de lo que hablan. Entran en los aviones pensando que este1n en sus propias casas. Piensan que todo es fe1cil, que ellos lo haredan mucho mejor. Que no tenemos ni idea de nada. Y podreda estenderme pero no sereda el cometido.A lo que quiero llegar con todo es que yo me considero una persona preparada. Y aunque se9 primeros auxilios, tengo estudios, se9 todos los procedimientos a seguir y me considero una persona que da un buen trato al pasaje sin importar lo que hay detre1s, tengo que decir que en un caso asi sf3lo un profesional puede hacerse al cargo. Lo me1s que podemos hacer es solicitar ayuda lo antes posible y acercar el FAK (equipo de primeros auxilios) o el EMK (equipo para casos de emergencia que solo puede utilizar un medico). Y todo esto como buen profesional, no implica dar la nota para que parezca que hacemos algo.Creo que es muy cruel echar siempre la culpa a las personas que trabajamos dentro, porque yo he tenido una emergencia a bordo y a nosotros nos afecta tanto como a cualquier pasajero. Quiero que esto quede muy muy claro.El sistema de organizacion de las empresas, los retrasos incluso nuestra propia formacif3n no depende de nosotros. Depende de todo MENOS DE NOSOTROS. Ahi este1n los de arriba.Por otro lado primeros auxilios tengo que decir que a mi jame1s me han dado un boca a boca por si existe una emergencia a bordo. bfCreeis que cualquiera se arriesgaria a hacer un boca a boca sin proteccif3n?? solo lo dejo caer. Yo puede que lo lleve, pero que mis compaf1eros lo tengan o no creo que es funcif3n de la compaf1ia. De dar una buena formacif3n, de hacer las cosas bien. Porque, tampoco he recibido la formacif3n para utilizar un desfibrilador.En conclusif3n. Nosotros damos la cara y hay veces que te da ganas de decir que en realidad tu empresa es una mierda pero que tienes que trabajar. Y hay cosas que no este1n en nuestras manos. Ni de los pasajeros ni de los tuilrpantes. Lo que es una verguenza es no saber de lo que se habla y dedicarse a hacer fotitos Dof1a heroina.Yo tambien tengo padres, hermanos, amigos que quiero que este9n seguros en un avif3n. A mi tambien me puede dar un infarto y quiero todos los medios necesarios. Ah!!! y por supuesto, yo tambien quiero llegar a mi casa (lo digo por los retrasos). Porque tomen nota, a mi no me pagan esas horas. EXACTO, NO ME LAS PAGAN.estrella
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